细胞株的筛选我们要注意加药时间以及维持浓度：

　　1.由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。所以细胞株筛选时不能太早;但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，终导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加筛选。随着细胞的代谢，浓度和活性都会下降，所以每3-5天都要更换一次筛选液。

　　2.加抗生素的时机，主要是考虑插入到细胞基因组的抗性基因是否已经得到表达。一般是转染48小时后加入抗生素。挑出单克隆后就可以用维持浓度，一般是稳定细胞株筛选浓度的1/2。

　　关于维持浓度，有人说细胞会出现对抗生素的抗性，应不断提高其浓度。而且如果要挑选几个阳性克隆中较高表达的克隆的话，可以调整抗生素的浓度。当然，抗性基因高表达，目的基因不一定就跟着高表达。

　　此外，也需稳定细胞系构建培养液：

　　加药筛选稳定细胞株约6天左右，细胞会大量死亡，孔中只剩下的细胞*。这时会出现：

　　1.死亡的细胞会裂解释放出有害物质，导致那些有表达阳性细胞死亡，即非选择性死亡，因此要及时换液。

　　2.孔中细胞数目很少，细胞之间的信号会变得很弱，也会导致阳性细胞的状态不佳甚至死亡。这个时候需要一种特殊的培养液，再转染后筛选稳转细胞株过程中就可以应用这种培养基。

　　3.适当增加血清浓度。